Ποια είναι η λειτουργία της ισοπροπονικής σε απομόνωση RNA;
Ο βασικός ρόλος στην απομόνωση RNA ανήκει στο φαινόλη/χλωροφόρμιο , όχι ισοπροπανόλη.
Εδώ είναι γιατί:
* φαινόλη/χλωροφόρμιο: Η κύρια λειτουργία του μίγματος φαινόλης/χλωροφόρμιο σε απομόνωση RNA είναι η διαχωρισμό κυτταρικών συστατικών. Η φαινόλη μετουσιώνει τις πρωτεΐνες και διαταράσσει τις κυτταρικές μεμβράνες, ενώ το χλωροφόρμιο διαχωρίζει περαιτέρω τις υδατικές και οργανικές φάσεις. Το RNA παραμένει στην υδατική φάση, ενώ οι πρωτεΐνες και άλλα κυτταρικά συντρίμμια μετακινούνται στην οργανική φάση.
* ισοπροπανόλη: Η ισοπροπανόλη χρησιμοποιείται μετά από Το στάδιο εκχύλισης φαινόλης/χλωροφόρμιο. Ο σκοπός του είναι να κατακρημνίσει το RNA από το υδατικό διάλυμα. Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι το RNA είναι πιο διαλυτό στο νερό από ό, τι στην ισοπροπανόλη. Η ισοπροπανόλη μειώνει αποτελεσματικά τη διαλυτότητα του RNA, προκαλώντας την συσσωμάτωση και σχηματίζουν ένα ορατό ίζημα.
Συνοπτικά:
* φαινόλη/χλωροφόρμιο είναι το βασικό αντιδραστήριο που διαχωρίζει το RNA από άλλα κυτταρικά συστατικά.
* ισοπροπανόλη Χρησιμοποιείται για τον καθίζηση του RNA από το διάλυμα, καθιστώντας ευκολότερη τη συλλογή και τον καθαρισμό.
