Τι συμβαίνει πρώτα στην παραγωγή ενός ανασυνδυασμένου πλασμιδίου;
Εδώ είναι γιατί:
1. Ο στόχος: Θέλετε να εισαγάγετε ένα συγκεκριμένο γονίδιο (το γονίδιο ενδιαφέροντος) σε ένα πλασμίδιο, δημιουργώντας ένα ανασυνδυασμένο πλασμίδιο.
2. Σημείο εκκίνησης: Για να γίνει αυτό, πρέπει πρώτα να αποκτήσετε το επιθυμητό γονίδιο. Αυτό περιλαμβάνει:
* Προσδιορισμός του γονιδίου: Αυτό μπορεί να περιλαμβάνει την έρευνα των υφιστάμενων βάσεων δεδομένων ή τη χρήση τεχνικών όπως η PCR για την ενίσχυση του γονιδίου από ένα δείγμα DNA.
* Εξαγωγή του γονιδίου: Μόλις αναγνωριστεί, το γονίδιο εξάγεται από την πηγή του (π.χ. ένα βακτηριακό κύτταρο, ένα ανθρώπινο κύτταρο κλπ.).
Τα άλλα βήματα που εμπλέκονται στην παραγωγή ανασυνδυασμένου πλασμιδίου:
1. Απομόνωση του γονιδίου ενδιαφέροντος: (έχει ήδη συζητηθεί)
2. πέψη του πλασμιδίου και του γονιδίου με ένζυμα περιορισμού:Αυτό δημιουργεί συμβατά κολλώδη άκρα και στα δύο θραύσματα DNA.
3. Απόκριση του γονιδίου στο πλασμίδιο: Το γονίδιο και το πλασμίδιο συνδέονται μαζί με Ligase DNA.
4. Μετασχηματισμός βακτηρίων με το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο: Το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο εισάγεται σε βακτήρια.
5. Επιλογή βακτηρίων που περιέχουν το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο: Τα βακτήρια που περιέχουν το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο ταυτοποιούνται και απομονώνονται.
6. Έκφραση του γονιδίου ενδιαφέροντος: Το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο εισάγεται στα βακτήρια και τα βακτήρια εκφράζουν το γονίδιο ενδιαφέροντος.
Επιτρέψτε μου να ξέρω αν θέλετε περισσότερες λεπτομέρειες σε οποιοδήποτε από αυτά τα βήματα!
