Μπορείτε να παρατηρήσετε βιώσιμα κύτταρα με μικροσκόπιο φθορισμού;
Φθορίζουσα χρώση
* Φυσικές βαφές: Χρησιμοποιούνται συγκεκριμένες χρωστικές που συνδέονται ή αλληλεπιδρούν με τα συστατικά των ζωντανών κυττάρων. Αυτές οι βαφές εκπέμπουν φως σε ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος όταν φωτίζονται με ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος διέγερσης.
* Κοινές βαφές:
* Calcein AM: Μια βαφή που εισέρχεται σε ζωντανά κύτταρα και διασπάται από ενδοκυτταρικές εστεράσες, παράγοντας ένα φθορίζον σήμα που υποδεικνύει τη βιωσιμότητα των κυττάρων.
* ιωδιούχο προπίδιο (PI): Μια βαφή που εισέρχεται μόνο σε κύτταρα με συμβιβασμένες μεμβράνες, υποδεικνύοντας νεκρά ή πεθαμένα κύτταρα.
* Άλλες βαφές: Πολλές άλλες φθορίζουσες βαφές είναι διαθέσιμες, στοχεύοντας συγκεκριμένες κυτταρικές δομές, οργανίδια ή διαδικασίες.
φθορίζουσα μικροσκοπία
* Φως διέγερσης: Το μικροσκόπιο χρησιμοποιεί ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος φωτός για να διεγείρει τη φθορίζουσα βαφή.
* Φίλτρο εκπομπών: Ένα φίλτρο εμποδίζει το φως διέγερσης και επιτρέπει μόνο στον εκπεμπόμενο φθορισμό να φτάσει στον ανιχνευτή.
* Σχηματισμός εικόνας: Ο ανιχνευτής καταγράφει το φθορίζον σήμα, δημιουργώντας μια εικόνα των κυττάρων όπου υπάρχει η βαφή.
Παρατήρηση βιώσιμων κυττάρων:
Χρησιμοποιώντας βαφές που επισημαίνουν ειδικά τα ζωντανά κύτταρα, όπως το Calcein AM, μπορείτε να διαφοροποιήσετε τα βιώσιμα κύτταρα από τα νεκρά ή τα πεθαμένα κύτταρα.
Πλεονεκτήματα χρήσης μικροσκοπίας φθορισμού για τη βιωσιμότητα των κυττάρων:
* υψηλή ευαισθησία: Επιτρέπει την ανίχνευση μικρών αριθμών ζωντανών κυττάρων.
* Ειδικότητα: Διαφορετικές βαφές μπορούν να χρησιμοποιηθούν για να στοχεύσουν συγκεκριμένα κυτταρικά συστατικά ή διεργασίες.
* Μη επεμβατική: Οι φθορίζουσες βαφές μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την παρατήρηση των ζωντανών κυττάρων χωρίς να διαταράξουν τη φυσιολογία τους.
Σκέψεις:
* τοξικότητα βαφής: Ορισμένες χρωστικές μπορεί να είναι τοξικές για τα κύτταρα σε υψηλές συγκεντρώσεις, έτσι απαιτείται προσεκτική βελτιστοποίηση.
* Φωτοφόρα: Οι φθορίζουσες βαφές μπορούν να εξασθενίσουν με την πάροδο του χρόνου όταν εκτίθενται σε φως διέγερσης, περιορίζοντας τη διάρκεια της παρατήρησης.
Συνοπτικά, η μικροσκοπία φθορισμού είναι ένα ισχυρό εργαλείο για την παρατήρηση και διαφοροποίηση βιώσιμων κυττάρων από νεκρά ή πεθαμένα κύτταρα, παρέχοντας πολύτιμες πληροφορίες για την υγεία και τη λειτουργία των κυττάρων.
