Γιατί οι πρωτεΐνες πρέπει να απομακρυνθούν πριν από την ποσοτική ανάλυση του DNA με την αντίδραση dische;
1. Οι πρωτεΐνες παρεμβαίνουν στην αντίδραση:
* Η αντίδραση Dische, η οποία είναι μια χρωματομετρική δοκιμασία, βασίζεται στην αντίδραση της ζάχαρης δεοξυριβόζης σε DNA με διφαινυλαμίνη για να παράγει ένα μπλε χρώμα.
* Οι πρωτεΐνες περιέχουν επίσης αμινοξέα με αντιδραστικές ομάδες που μπορούν να παρεμβαίνουν στην αντίδραση, οδηγώντας σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα και ανακριβή ποσοτικοποίηση του DNA.
2. Οι πρωτεΐνες απορροφούν στο ίδιο μήκος κύματος με το προϊόν αντίδρασης:
* Και οι δύο πρωτεΐνες και το μπλε χρώμα της αντίδρασης Dische απορροφούν το φως σε παρόμοιο μήκος κύματος (περίπου 595 nm).
* Αυτό σημαίνει ότι η παρουσία πρωτεϊνών θα αυξήσει την απορρόφηση Στο μετρούμενο μήκος κύματος, συμβάλλοντας περαιτέρω στην ανακριβή ποσοτικοποίηση του DNA.
Επομένως, η αφαίρεση πρωτεϊνών πριν από την αντίδραση Dische είναι ζωτικής σημασίας για να εξασφαλιστεί ακριβής και αξιόπιστη ποσοτικοποίηση DNA. Αυτό επιτυγχάνεται συνήθως μέσω κατακρήμνισης πρωτεΐνης Μέθοδοι, όπως η χρήση τριχλωροοξικού οξέος (TCA) ή υπερχλωρικό οξύ (PCA).
Συνοπτικά: Οι πρωτεΐνες παρεμβαίνουν στην αντίδραση Dische αντιδρώντας με τα αντιδραστήρια και απορροφώντας στο ίδιο μήκος κύματος με το προϊόν αντίδρασης. Η απομάκρυνσή τους είναι απαραίτητη για την απόκτηση ακριβών αποτελεσμάτων ποσοτικοποίησης του DNA.
