Πώς δρα η τρυψίνη στην κυτταρική καλλιέργεια

Η θρυψίνη είναι μια πρωτεάση σερίνης που διασπά τα υπολείμματα λυσίνης και αργινίνης στο καρβοξυτελικό άκρο των πεπτιδίων. Είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο ένζυμο στην κυτταρική καλλιέργεια για την απελευθέρωση των προσκολλημένων κυττάρων από τις επιφάνειες των αγγείων καλλιέργειας. Η θρυψίνη είναι εύκολα ανεκτή από τους περισσότερους τύπους κυττάρων που αναπτύσσονται σε καλλιέργειες. Η δράση του μπορεί εύκολα να εξουδετερωθεί με την προσθήκη ορού στο μέσο καλλιέργειας. Αυτά τα δύο χαρακτηριστικά της θρυψίνης διευκολύνουν τη χρήση τους σε κυτταροκαλλιέργειες. Γενικά, θρυψίνη προστίθεται στις κυτταρικές καλλιέργειες με EDTA. Ο ρόλος της θρυψίνης στις κυτταρικές καλλιέργειες περιγράφεται σε αυτό το άρθρο.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι η Τρυψίνη
     – Ορισμός, Χαρακτηριστικά, Λειτουργία
2. Πώς δρα η τρυψίνη στην κυτταρική καλλιέργεια
     – Ο ρόλος της θρυψίνης στην κυτταρική καλλιέργεια

Βασικοί όροι:Συγκολλητικές πρωτεΐνες, κυτταρική προσκόλληση, πεπτικό ένζυμο, θρυψίνη, θρυψίνη

Τι είναι η τρυψίνη

Η θρυψίνη είναι ένα πεπτικό ένζυμο που διασπά τις πρωτεΐνες στο πεπτικό σύστημα πολλών σπονδυλωτών. Βρίσκεται στον παγκρεατικό χυμό. Η θρυψίνη διασπά τα υπολείμματα λυσίνης και αργινίνης του καρβοξυτελικού άκρου των πεπτιδίων. Ωστόσο, δεν τα διασπά όταν αυτά τα δύο αμινοξέα ακολουθούνται από πραλίνη. Η δράση της θρυψίνης χρησιμοποιείται σε πολλές βιοτεχνολογικές διεργασίες και η δράση της θρυψίνης είναι γνωστή ως θρυψίνη ή πρωτεόλυση θρυψίνης. Η κρυσταλλική δομή της θρυψίνης φαίνεται στο σχήμα 1 .

Εικόνα 1:Τρυψίνη

Το βέλτιστο pH για τη δράση της θρυψίνης είναι 7,6-8,5. Γενικά, το κόκκινο της φαινόλης χρησιμοποιείται σε προσδιορισμούς θρυψίνης για την παρακολούθηση του παραπάνω εύρους pH. Το κόκκινο της φαινόλης δίνει ένα ροζ χρώμα σε αυτό το εύρος pH. Οι δοκιμασίες θρυψίνης πραγματοποιούνται σε ξηρό πάγο.

Πώς δρα η τρυψίνη στην κυτταρική καλλιέργεια

Οι πρωτεΐνες της πλασματικής μεμβράνης είναι υπεύθυνες για μια μεγάλη ποικιλία λειτουργιών που είναι απαραίτητες για τη διατήρηση της φυσιολογικής φυσιολογικής δραστηριότητας του κυττάρου. Ορισμένες πρωτεΐνες της πλασματικής μεμβράνης, όπως οι οικογένειες καντερίνης, είναι συγκολλητικές πρωτεΐνες που χρησιμεύουν ως άγκυρες, συνδέοντας τις πρωτεΐνες του κυτταροσκελετού με την εξωκυτταρική μήτρα. Αυτό βοηθά στην κυτταρική προσκόλληση και στη μετανάστευση των κυττάρων. Οι συγκολλητικές πρωτεΐνες εντός της πλασματικής μεμβράνης φαίνονται στο σχήμα 2 .

Εικόνα 2:Συγκολλητικές πρωτεΐνες κυττάρων

Στις κυτταροκαλλιέργειες, η θρυψίνη μπορεί να προστεθεί στο μέσο για να απελευθερωθούν τα προσκολλημένα κύτταρα από την επιφάνεια του δοχείου καλλιέργειας με πέψη των συγκολλητικών πρωτεϊνών. Η θρυψίνη απελευθερώνει επίσης κύτταρα από συσσωματώματα μέσω της πέψης των συγκολλητικών πρωτεϊνών. Το EDTA προστίθεται επίσης σε καλλιέργειες κυττάρων μαζί με θρυψίνη για τη χηλική ένωση δισθενών ιόντων στο μέσο. Τα ιόντα ασβεστίου και μαγνησίου μπορεί να αναστείλουν τη δράση της θρυψίνης. Τελικά, η θρυψίνη βοηθά στη λήψη μεμονωμένων κυττάρων από τις κυτταρικές καλλιέργειες, διευκολύνοντας την κατάντη επεξεργασία των κυττάρων.

Συμπέρασμα

Η θρυψίνη είναι ένα φωτολυτικό ένζυμο που αφομοιώνει τα πεπτίδια. Η θρυψίνη χρησιμοποιείται ευρέως σε κυτταροκαλλιέργεια προκειμένου να ληφθούν μεμονωμένα κύτταρα καθώς η θρυψίνη αφομοιώνει τις συγκολλητικές πρωτεΐνες και απελευθερώνει τα κύτταρα στο μέσο.

Αναφορά:

1. «Επαγόμενη από θρυψίνη Αλλαγή πρωτεοειδών κατά τη διάρκεια της κυτταρικής υποκαλλιέργειας σε κύτταρα θηλαστικών». Journal of Biomedical Science , BioMed Central, 11 Μαΐου 2010, Διαθέσιμο εδώ.

Εικόνα Ευγενική προσφορά:

1. "1UTN" Από χρήστη:DrKjaergaard – Ίδια εργασία:Από το αρχείο PDB 1UTN. Δημιουργήθηκε με PyMol (Δημόσιος Τομέας) μέσω του Commons Wikimedia
2. "Cell Adhesion" Από τον ZabMilenko στην Αγγλική Wikipedia – Μεταφέρθηκε από το en.wikipedia στα Commons από το προμελετημένο Chaos χρησιμοποιώντας το CommonsHelper (Δημόσιος Τομέας) μέσω του Commons Wikimedia