Γιατί ένα εργαστήριο μπορεί να χρησιμοποιεί νουκλεοτίδια dideoxy;
* Τερματισμός αλυσίδας: Τα DDNTPs δεν διαθέτουν την 3'-υδροξυλομάδα που είναι απαραίτητη για την πολυμεράση DNA να προσθέσει το επόμενο νουκλεοτίδιο σε μια αναπτυσσόμενη αλυσίδα. Αυτό σημαίνει ότι όταν ένα DDNTP ενσωματώνεται σε ένα κλώνο DNA, η αλυσίδα δεν μπορεί να επεκταθεί περαιτέρω.
* Ετικέτα φθορισμού: Κάθε τύπος DDNTP (DDATP, DDCTP, DDGTP, DDTTP) επισημαίνεται με διαφορετική φθορίζουσα βαφή. Αυτό επιτρέπει την ταυτοποίηση κάθε νουκλεοτιδίου στην αλληλουχία.
* Δημιουργία σκάλας θραυσμάτων: Κατά τη διάρκεια της αλληλουχίας, χρησιμοποιείται ένα μείγμα φυσιολογικών νουκλεοτιδίων (DNTPs) και DDNTPs. Η πολυμεράση θα ενσωματώσει τυχαία είτε ένα φυσιολογικό είτε ένα αμφίδρομο νουκλεοτίδιο. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα ένα μίγμα θραυσμάτων DNA με διαφορετικά μήκη, κάθε τερματισμό σε ένα συγκεκριμένο νουκλεοτίδιο λόγω της ενσωμάτωσης ενός DDNTP.
* Ανάγνωση της ακολουθίας: Διαχωρίζοντας αυτά τα θραύσματα κατά μέγεθος (συνήθως μέσω ηλεκτροφόρησης) και ανίχνευση των ετικετών φθορισμού, μπορεί να προσδιοριστεί η ακριβής αλληλουχία των νουκλεοτιδίων στο αρχικό θραύσμα ϋΝΑ.
Ως εκ τούτου, ένα εργαστήριο μπορεί να χρησιμοποιεί νουκλεοτίδια dideoxy για τους ακόλουθους λόγους:
* Γονιδιωματική ανάλυση: Αλληλουχία ολόκληρων γονιδιωμάτων ή συγκεκριμένων γονιδίων για τον εντοπισμό μεταλλάξεων, παραλλαγών και άλλων γενετικών πληροφοριών.
* Ιατροδικαστική επιστήμη: Προφίλ DNA για τον εντοπισμό ατόμων ή τη σύνδεση υπόπτων με σκηνές εγκλημάτων.
* Ιατρική διάγνωση: Προσδιορισμός των γενετικών διαταραχών, ανίχνευση παθογόνων ή παρακολούθησης της εξέλιξης της νόσου.
* Έρευνα: Μελετώντας την γονιδιακή έκφραση, τη λειτουργία της πρωτεΐνης και τις εξελικτικές σχέσεις.
Εν ολίγοις, τα νουκλεοτίδια Dideoxy είναι ζωτικής σημασίας για τη μέθοδο προσδιορισμού αλληλουχίας Sanger, ένα ισχυρό εργαλείο που χρησιμοποιείται σε διάφορες επιστημονικές και ιατρικές εφαρμογές.
