Πώς λειτουργεί το χλωριούχο νάτριο στην εκχύλιση DNA;
1. Κυτταρική λύση:
- Όταν προσθέτετε ένα ρυθμιστικό λύσης (που περιέχει απορρυπαντικά όπως SDS) σε κύτταρα, διασπά την κυτταρική μεμβράνη και την πυρηνική μεμβράνη, απελευθερώνοντας το DNA στο διάλυμα.
- Το NaCl βοηθά στη σταθεροποίηση του DNA με την θωράκιση των αρνητικά φορτισμένων φωσφορικών ομάδων στη ραχοκοκαλιά του DNA από τα απορρυπαντικά. Αυτό εμποδίζει το DNA να γίνει υπερβολικά μετουσιωμένο και υποβαθμισμένο.
2. Βροχόπτωση πρωτεΐνης:
- Μετά τη λύση των κυττάρων, το λύμα περιέχει ένα μίγμα DNA, πρωτεΐνες και άλλα κυτταρικά υπολείμματα.
- Η προσθήκη NaCl στο λύμα αναγκάζει τις πρωτεΐνες να καταβυθιστούν εκτός διαλύματος.
- Αυτό συμβαίνει επειδή το NaCl εξουδετερώνει τις χρεώσεις στις πρωτεΐνες , καθιστώντας τους λιγότερο διαλυτό και πιο επιρρεπείς σε συσσώρευση μαζί.
- Οι κατακρημνισμένες πρωτεΐνες μπορούν στη συνέχεια να απομακρυνθούν με φυγοκέντρηση, αφήνοντας το DNA στο υπερκείμενο.
3. Κατοίκους DNA:
- Σε ορισμένα πρωτόκολλα εκχύλισης DNA, το NaCl χρησιμοποιείται επίσης στο τελικό βήμα για να κατακρημνίσει το ίδιο το DNA.
- Προσθέτοντας ισοπροπανόλη ή αιθανόλη στο υπερκείμενο, το DNA γίνεται λιγότερο διαλυτό και κατακρημνίζεται από το διάλυμα.
- Η παρουσία του NaCl ενισχύει αυτή τη διαδικασία με περαιτέρω αφυδατώντας τα μόρια ϋΝΑ, καθιστώντας τα πιο επιρρεπή σε συσσωμάτωση.
Συνοπτικά:
- Το NaCl δεν είναι ο πρωταρχικός παράγοντας που απομονώνει το DNA, αλλά παίζει σημαντικό υποστηρικτικό ρόλο από:
- Σταθεροποιητικό DNA κατά τη διάρκεια της κυτταρικής λύσης.
- Διευκόλυνση της κατακρήμνισης των πρωτεϊνών, επιτρέποντας την απομάκρυνσή τους από το προϊόν λύσης.
- Ενίσχυση της βροχόπτωσης του DNA, βοηθώντας στον καθαρισμό του.
Η κατανόηση του ρόλου του NaCl στην εκχύλιση DNA σας βοηθά να εκτιμήσετε τη σημασία κάθε συστατικού στο πρωτόκολλο και σας επιτρέπει να βελτιστοποιήσετε τη διαδικασία εξαγωγής για καλύτερη απόδοση και καθαρότητα DNA.
