Διαφορά μεταξύ χρωματογραφίας αντίστροφης φάσης και υδροφοβικής αλληλεπίδρασης

Η κύρια διαφορά μεταξύ ανάστροφης φάσης και χρωματογραφίας υδρόφοβης αλληλεπίδρασης είναι ότι η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης (RPC) χρησιμοποιεί ένα πιο υδρόφοβο μέσο, ​​το οποίο οδηγεί σε ισχυρότερες αλληλεπιδράσεις ενώ η χρωματογραφία υδρόφοβης αλληλεπίδρασης (HIC) χρησιμοποιεί λιγότερο υδρόφοβο μέσο σε σύγκριση με το μέσο στο η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης .

Η χρωματογραφία ανάστροφης φάσης και η χρωματογραφία υδρόφοβης αλληλεπίδρασης είναι δύο χρωματογραφικές τεχνικές που εξαρτώνται από τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ υδρόφοβων επιφανειών ενός μέσου χρωματογραφίας και των υδρόφοβων κηλίδων στην επιφάνεια των βιομορίων.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι η Χρωματογραφία Αντίστροφης Φάσης
     – Ορισμός, Βήματα, Εφαρμογές
2. Τι είναι η Υδροφοβική Χρωματογραφία Αλληλεπίδρασης
     – Ορισμός, Βήματα, Εφαρμογές
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της χρωματογραφίας ανάστροφης φάσης και της χρωματογραφίας υδροφοβικής αλληλεπίδρασης
     – Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της χρωματογραφίας ανάστροφης φάσης και της χρωματογραφίας υδροφοβικής αλληλεπίδρασης
     – Σύγκριση βασικών διαφορών

Βασικοί όροι

Χρωματογραφία υδροφοβικής αλληλεπίδρασης, HIC, μέσα, χρωματογραφία ανάστροφης φάσης, RPC

Τι είναι η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης

Η χρωματογραφία ανάστροφης φάσης (RPC) είναι μια χρωματογραφική τεχνική που χρησιμοποιείται για τον καθαρισμό και την ανάλυση βιομορίων όπως πρωτεΐνες, πεπτίδια και ολιγονουκλεοτίδια. Δίνει διαχωρισμό υψηλής ανάλυσης και είναι ιδανικό για τη χαρτογράφηση πεπτιδίων και τον έλεγχο καθαρότητας. Το RPC χρησιμοποιείται συχνότερα στην τελική στίλβωση πεπτιδίων και ολιγονουκλεοτιδίων.

Δύο κύριοι τύποι υδρόφοβων μέσων μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως στατική φάση:σφαιρίδια πυριτίου καλυμμένα με αλυσίδες άνθρακα ή γυμνά υδρόφοβα πολυμερή. Μια στήλη γεμίζεται με τα υδρόφοβα μέσα σε μια μορφή συσσωρευμένης κλίνης στην οποία εφαρμόζεται το δείγμα. Ένας παράγοντας ζευγαρώματος ιόντων όπως το τριφθοροξικό οξύ (TFA) μπορεί να προστεθεί στην κινητή φάση για να ενισχύσει τον σχηματισμό υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων. Ένας οργανικός τροποποιητής όπως 5% ακετονιτρίλιο χρησιμοποιείται στην αρχή και η έκλουση μπορεί να ξεκινήσει με την αύξηση του % του ακετονιτριλίου.

Εικόνα 1:Θεωρία χρωματογραφίας αντίστροφης φάσης

Τα βιομόρια που είναι λιγότερο υδρόφοβα/πιο πολικά θα εκλούονται πρώτα ενώ τα πιο υδρόφοβα μόρια θα εκλούονται αργότερα. Η RPC είναι η χρωματογραφική τεχνική με την υψηλότερη ανάλυση.

Τι είναι η Χρωματογραφία Υδροφοβικής Αλληλεπίδρασης

Η χρωματογραφία υδροφοβικής αλληλεπίδρασης (HIC) είναι η άλλη τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό βιομορίων με βάση την υδροφοβικότητα υπό μέτριες συνθήκες. Είναι μια ιδανική τεχνική για τον καθαρισμό των πρωτεϊνών όταν τα δείγματα πρέπει να υποβληθούν σε καθίζηση θειικού αμμωνίου στην αρχική συγκέντρωση δείγματος και καθαρισμό. Το αυξημένο επίπεδο άλατος κατά τη διάρκεια της καθίζησης θειικού αμμωνίου αυξάνει την αλληλεπίδραση μεταξύ των υδρόφοβων συστατικών.

Εικόνα 2:Επίδραση της υψηλής συγκέντρωσης αλατιού στις υδροφοβικές αλληλεπιδράσεις

Το υδρόφοβο μέσο του HIC αποτελείται από μια αδρανή μήτρα σφαιρικών σωματιδίων επικαλυμμένα με συνδέτες που περιέχουν ομάδες αλκυλίου ή αρυλίου. Οι υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις συμβαίνουν κάτω από μέτρια υψηλές συγκεντρώσεις άλατος (συνήθως 1–2 M θειικό αμμώνιο ή 3 M NaCl). Το ρυθμιστικό διάλυμα εκκίνησης εξασφαλίζει τη δέσμευση των πρωτεϊνών που ενδιαφέρουν στο μέσο ενώ απομακρύνει τις ακαθαρσίες. Το ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης περιέχει χαμηλή συγκέντρωση άλατος, αποδυναμώνοντας την αλληλεπίδραση μεταξύ των πρωτεϊνών και της στατικής φάσης.

Ομοιότητες μεταξύ χρωματογραφίας ανάστροφης φάσης και χρωματογραφίας υδροφοβικής αλληλεπίδρασης

• Η χρωματογραφία ανάστροφης φάσης και υδρόφοβης αλληλεπίδρασης είναι δύο τεχνικές που χρησιμοποιούνται για τον διαχωρισμό των βιομορίων με βάση την υδροφοβικότητά τους.
• Η κινητή φάση και των δύο τεχνικών είναι είτε νερό είτε οργανικός διαλύτης.
• Χρησιμοποιούν συσκευασμένες στήλες κρεβατιού.
• Η προσωρινή μνήμη έναρξης διασφαλίζει τη σύνδεση των επιθυμητών μορίων στη στήλη.
• Τα μόρια με τη χαμηλότερη υδροφοβικότητα μπορεί να εκλούονται πρώτα ενώ περισσότερα υδρόφοβα μόρια μπορεί να εκλούονται αργότερα.
• Το τελικό βήμα πλύσης εκλούει τα πιο σφιχτά συνδεδεμένα μόρια.
• Η ανάλυση και των δύο τεχνικών είναι ένας συνδυασμός της επιλεκτικότητας (βαθμός διαχωρισμού μεταξύ των κορυφών),  αποτελεσματικότητας (η ικανότητα παραγωγής στενών, συμμετρικών κορυφών) της τεχνικής, της μάζας του δείγματος και του χρόνου διατήρησης.

Διαφορά μεταξύ χρωματογραφίας ανάστροφης φάσης και χρωματογραφίας υδροφοβικής αλληλεπίδρασης

Ορισμός

Η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης (RPC) αναφέρεται στην τεχνική διαχωρισμού με την υψηλότερη ανάλυση που βασίζεται στην υδροφοβικότητα των μορίων σε ένα μείγμα, ενώ η χρωματογραφία υδρόφοβης αλληλεπίδρασης (HIC) αναφέρεται σε έναν τύπο τεχνικής διαχωρισμού με βάση την υδροφοβικότητα αλλά, λειτουργεί κάτω από σχετικά ήπιες συνθήκες.

Υδροφοβία

Το RPC λειτουργεί κάτω από πιο υδρόφοβες συνθήκες ενώ το HIC λειτουργεί σε σχετικά ήπιες υδροφοβικές συνθήκες.

Αλληλεπιδράσεις

Η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης οδηγεί σε ισχυρότερες αλληλεπιδράσεις μεταξύ των μορίων και της στατικής φάσης που πρέπει να αντιστραφεί κατά την έκλουση από έναν οργανικό τροποποιητή, ενώ η HIC οδηγεί σε μέτρια υψηλές αλληλεπιδράσεις μεταξύ της στατικής φάσης και της μόρια.

Υδροφοβικά μέσα

Το RPC χρησιμοποιεί είτε σφαιρίδια πυριτίου καλυμμένα με αλυσίδες άνθρακα είτε γυμνά υδρόφοβα πολυμερή, ενώ το HIC χρησιμοποιεί μια αδρανή μήτρα σφαιρικών σωματιδίων επικαλυμμένα με συνδέτες που περιέχουν ομάδες αλκυλίου ή αρυλίου.

Έναρξη buffer

Το ρυθμιστικό διάλυμα έναρξης στο RPC χρησιμοποιεί τριφθοροξικό οξύ (TFA) ενώ το ρυθμιστικό διάλυμα έναρξης του HIC χρησιμοποιεί μέτρια υψηλές συγκεντρώσεις αλατιού.

έκλουση

Το αυξημένο ποσοστό ακετονιτριλίου ξεκινά την έκλουση σε RPC ενώ η φθίνουσα συγκέντρωση άλατος ξεκινά την έκλουση σε HIC.

Ανάλυση

Η χρωματογραφία ανάστροφης φάσης είναι η χρωματογραφική τεχνική με την υψηλότερη ανάλυση, ενώ η ανάλυση του HIC είναι χαμηλή σε σύγκριση με την RPC.

Εφαρμογές

Το RPC χρησιμοποιείται στον διαχωρισμό πρωτεϊνών, πεπτιδίων και ολιγονουκλεοτιδίων ενώ το HIC χρησιμοποιείται κυρίως στον καθαρισμό πρωτεϊνών.

Συμπέρασμα

Η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης είναι η χρωματογραφική τεχνική με την υψηλότερη ανάλυση, η οποία λειτουργεί σε συνθήκες υψηλής υδροφοβίας. Όμως, το HIC λειτουργεί κάτω από μέτριες υδροφοβικές συνθήκες. Το RPC και το HIC είναι οι δύο τύποι τεχνικών διαχωρισμού που βασίζονται στην υδροφοβικότητα. Η κύρια διαφορά μεταξύ RPC και HIC είναι ο βαθμός υδροφοβικότητας που χρησιμοποιείται σε κάθε τεχνική.

Αναφορά:

1. Υδροφοβική Αλληλεπίδραση και Χρωματογραφία Αντεστραμμένης Φάσης:Αρχές και Μέθοδοι . GE Healthcare, 2006. Διαθέσιμο εδώ

Εικόνα Ευγενική προσφορά:

1. "Σχήμα έκλουσης κλίσης αντίστροφης φάσης" Από Nategm – Δική εργασία (CC BY-SA 4.0) μέσω του Commons Wikimedia   
2. "Hicsalt" Από τον Daliak στα Αγγλικά Wikibooks – Μεταφέρθηκε από τα en.wikibooks στα Commons. (Δημόσιος Τομέας) μέσω Commons Wikimedia