Ποια είναι η διαφορά μεταξύ MTT και MTS Assay

Η κύρια διαφορά μεταξύ της ανάλυσης MTT και MTS είναι ότι Ο προσδιορισμός ΜΤΤ έχει ένα επιπλέον βήμα που σχετίζεται με τη διαλυτοποίηση κρυστάλλων φορμαζάνης, ενώ η ανάλυση MTS δεν σχετίζεται με τη διαλυτοποίηση κρυστάλλων φορμαζάνης .

Η ανάλυση MTT και MTS είναι δύο τύποι αναλύσεων που χρησιμοποιούνται για τη μέτρηση της βιωσιμότητας των κυττάρων in vitro . Βοηθούν στην αποκάλυψη της επίδρασης των δοκιμαστικών μορίων στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την κυτταροτοξικότητα, επηρεάζοντας τη βιωσιμότητα των κυττάρων. Επιπλέον, η ανάλυση MTT είναι πιο χρονοβόρα από την ανάλυση MTS.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι το MTT Assay
     – Ορισμός, Διαδικασία, Σημασία
2. Τι είναι το MTS Assay
     – Ορισμός, Διαδικασία, Σημασία
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ MTT και MTS Assay
     – Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ MTT και MTS Assay
     – Σύγκριση βασικών διαφορών

Βασικοί όροι

Πολλαπλασιασμός κυττάρων, κυτταρική βιωσιμότητα, κυτταροτοξικότητα, ανάλυση MTS, δοκιμασία MTT

Τι είναι η ανάλυση MTT

Η ανάλυση MTT είναι η πρώτη ομοιογενής ανάλυση βιωσιμότητας κυττάρων που αναπτύχθηκε για μια μορφή 96 φρεατίων κατάλληλη για διαλογή υψηλής απόδοσης (HTS). Η αρχή αυτής της δοκιμασίας είναι ο προσδιορισμός της βιωσιμότητας των κυττάρων με βάση την ικανότητα των κυττάρων να μειώνουν μια χρωστική τετραζολίου με τη δράση του ενζύμου, της εξαρτώμενης από NAD(P)H κυτταρικής οξειδορεδουκτάσης, που υπάρχει στα βιώσιμα κύτταρα. Εδώ, η βαφή τετραζολίου που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό ΜΤΤ είναι το βρωμιούχο 3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2,5-διφαινυλτετραζόλιο, το οποίο έχει κίτρινο χρώμα. Η προαναφερθείσα ενζυματική δράση έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό ενός αδιάλυτου προϊόντος φορμαζάνης με τη μορφή κρυστάλλων που κατακρημνίζονται μέσα στα κύτταρα και κοντά στην κυτταρική επιφάνεια και στο μέσο καλλιέργειας. Ωστόσο, καθώς η ποσότητα του προϊόντος φορμαζάνης μετράται με τη μέτρηση της απορρόφησης, οι αδιάλυτοι κρύσταλλοι πρέπει πρώτα να διαλυτοποιηθούν και στη συνέχεια η απορρόφηση μπορεί να μετρηθεί στα 570 nm.

Εικόνα 1:Αντίδραση MTT

Ωστόσο, αν και η ανάλυση MTT χρησιμοποιεί λιγότερα υλικά και βήματα, υπάρχουν ορισμένα μειονεκτήματα σε αυτή τη μέθοδο. Η ανάλυση δεν είναι κατάλληλη για εναιώρηση κυττάρων. Επιπλέον, οι κατακρημνισμένες πρωτεΐνες και τα κυτταρικά υπολείμματα που υπάρχουν στο δείγμα μπορεί να επηρεάσουν τη μέτρηση της απορρόφησης, μειώνοντας την ευαισθησία καθώς και την ακρίβεια της ανάλυσης. Επίσης, ο χρόνος ανάλυσης και ο αριθμός των κυττάρων που υπάρχουν στο δείγμα πρέπει να βελτιστοποιηθούν για κάθε τύπο κυττάρου.

Τι είναι η ανάλυση MTS

Ο προσδιορισμός MTS είναι μια νέα μέθοδος για τον προσδιορισμό MTT καθώς χρησιμοποιεί έναν νέο τύπο βαφής τετραζολίου, που τελικά καταλήγει σε ένα υδατικό, διαλυτό προϊόν φορμαζάνης. Εδώ, η χρωστική τετραζολίου που χρησιμοποιείται στον προσδιορισμό MTS είναι 3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-5-(3-καρβοξυμεθοξυφαινυλ)-2-(4-σουλφοφαινυλ)-2Η-τετραζόλιο. Ο σχηματισμός της διαλυτής χρωστικής φορμαζάνης λαμβάνει χώρα παρουσία μεθοθειικής φαιναζίνης (PMS), η οποία χρησιμεύει ως ενδιάμεσος δέκτης ηλεκτρονίων, μεταφέροντας ηλεκτρόνια από το NADH για την αναγωγή της βαφής τετραζολίου, σχηματίζοντας το διαλυτό προϊόν φορμαζάνης.

Εικόνα 2:Πλάκα MTT

Ο άμεσος σχηματισμός ενός διαλυτού προϊόντος φορμαζάνης μειώνει το στάδιο διαλυτοποίησης του προϊόντος φορμαζάνης της ανάλυσης ΜΤΤ. Επομένως, η ανάλυση MTS είναι πιο αποτελεσματική και λιγότερο χρονοβόρα. Επίσης, αφαιρεί πιθανά σφάλματα όπως απώλεια κυττάρων, που μπορεί να συμβεί κατά την αφαίρεση του μέσου και τη διαλυτοποίηση του προϊόντος φορμαζάνης. Επιπλέον, το προκύπτον προϊόν φορμαζάνης έχει πιο σκούρο χρώμα. Αυτό αυξάνει την ευαισθησία και την ακρίβεια της ανάλυσης.

Similarities Between MTT and MTS Assay

• Η ανάλυση MTT και MTS είναι δύο τύποι αναλύσεων που καθορίζουν τη βιωσιμότητα των κυττάρων in vitro.
• Και οι δύο δοκιμές βοηθούν στην αξιολόγηση της επίδρασης των δοκιμαστικών μορίων στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την κυτταροτοξικότητα.
• Επίσης, και οι δύο είναι χρωματομετρικές αναλύσεις.
• Επιπλέον, αξιολογούν τη μεταβολική δραστηριότητα των κυττάρων με βάση την ικανότητα των κυττάρων να μειώνουν τη χρωστική τετραζολίου στη φορμαζάνη της.
• Επιπλέον, το ένζυμο που ευθύνεται για την παραπάνω μείωση είναι η εξαρτώμενη από το NAD(P)H κυτταρική οξειδορεδουκτάση, η οποία υπάρχει σε βιώσιμα κύτταρα.
• Επιπλέον, η αντίδραση αναγωγής λαμβάνει χώρα έξω από το κύτταρο με μεταφορά ηλεκτρονίων στην πλασματική μεμβράνη.
• Το αντιδραστήριο MTT είναι φωτοευαίσθητο. Ως εκ τούτου, αυτές οι αναλύσεις πρέπει να εκτελούνται στο σκοτάδι.
• Εξάλλου, ο χρόνος επώασης και για τις δύο δοκιμές είναι ο ίδιος μετά την προσθήκη χρωστικής τετραζολίου και είναι 1 έως 4 ώρες στους 37°C.

Διαφορά μεταξύ MTT και MTS Assay

Ορισμός

Ο προσδιορισμός MTT αναφέρεται σε μια χρωματομετρική δοκιμασία για την αξιολόγηση της μεταβολικής δραστηριότητας των κυττάρων, ενώ ο προσδιορισμός MTS αναφέρεται σε έναν προσδιορισμό ΜΤΤ «ενός σταδίου» που προσφέρει την ευκολία προσθήκης του αντιδραστηρίου απευθείας στην κυτταρική καλλιέργεια χωρίς τα διακοπτόμενα βήματα που απαιτούνται στον προσδιορισμό ΜΤΤ. Επομένως, αυτή είναι η κύρια διαφορά μεταξύ της ανάλυσης MTT και MTS.

Τύπος βαφής τετραζολίου που χρησιμοποιείται στην ανάλυση

Επιπλέον, ενώ η δοκιμασία ΜΤΤ χρησιμοποιεί βρωμιούχο ΜΤΤ (3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2,5-διφαινυλτετραζόλιο), η ανάλυση MTS χρησιμοποιεί MTS (3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-5 -(3-καρβοξυμεθοξυφαινυλ)-2-(4-σουλφοφαινυλ)-2Η-τετραζόλιο).

Η διαλυτότητα του προϊόντος Formazan

Επίσης, το προϊόν φορμαζάνης στον προσδιορισμό MTT είναι αδιάλυτο ενώ το προϊόν φορμαζάνης στον προσδιορισμό MTS είναι διαλυτό. Ως εκ τούτου, αυτή είναι μια σημαντική διαφορά μεταξύ της ανάλυσης MTT και MTS.

Μέτρηση απορρόφησης

Επιπλέον, η απορρόφηση μετράται στα 570 nm στον προσδιορισμό MTT ενώ η απορρόφηση μετράται στα 490 nm.

Ώρα

Ο χρόνος είναι επίσης μια διαφορά μεταξύ της ανάλυσης MTT και MTS. Η ανάλυση MTS είναι λιγότερο αναλώσιμη από την ανάλυση MTT.

Ευαισθησία και ακρίβεια

Επιπλέον, η ανάλυση MTT είναι λιγότερο ευαίσθητη και λιγότερο ακριβής, καθώς τα κυτταρικά υπολείμματα και οι κατακρημνισμένες πρωτεΐνες μπορούν να επηρεάσουν τη μέτρηση απορρόφησης, ενώ η ανάλυση MTS είναι πιο ευαίσθητη και ακριβής λόγω του σχηματισμού πιο σκούρου προϊόν φορμαζάνης.

Κόστος

Μια άλλη διαφορά μεταξύ της ανάλυσης MTT και MTS είναι το κόστος. Ο προσδιορισμός MTT είναι λιγότερο δαπανηρός από τον προσδιορισμό MTS.

Συμπέρασμα

Ο προσδιορισμός MTT είναι μια κλασική ανάλυση για τη μέτρηση της βιωσιμότητας των κυττάρων για την αξιολόγηση της επίδρασης των δοκιμαστικών μορίων στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την κυτταροτοξικότητα. Ωστόσο, το προκύπτον προϊόν φορμαζάνης στον προσδιορισμό ΜΤΤ είναι αδιάλυτο. Ως εκ τούτου, αυτός ο προσδιορισμός απαιτεί ένα επιπλέον στάδιο για τη διαλυτοποίηση του προϊόντος φορμαζάνης. Αντίθετα, ο προσδιορισμός MTS είναι μια νέα μέθοδος για τη μέτρηση της βιωσιμότητας των κυττάρων και χρησιμοποιεί ένα νέο είδος άλατος τετραζολίου, το οποίο παράγει μια διαλυτή φορμαζάνη, μειώνοντας ένα βήμα στη διαδικασία προσδιορισμού ΜΤΤ. Επομένως, ο προσδιορισμός MTS είναι πιο αποτελεσματικός σε σύγκριση με τον προσδιορισμό MTT. Ως εκ τούτου, η κύρια διαφορά μεταξύ της ανάλυσης MTT και MTS είναι τα χαρακτηριστικά του προϊόντος φορμαζάνης.

Αναφορά:

1. Riss TL, Moravec RA, Niles AL, et al. Δοκιμασίες βιωσιμότητας κυττάρων. 1 Μαΐου 2013 [Ενημερώθηκε 1 Ιουλίου 2016]. Στο:Sittampalam GS, Coussens NP, Brimacombe K, et al., συντάκτες. Εγχειρίδιο καθοδήγησης προσδιορισμού [Διαδίκτυο]. Bethesda (MD):Eli Lilly &Company and the National Center for Advancing Translational Sciences; 2004-.Διαθέσιμο εδώ.

Εικόνα Ευγενική προσφορά:

1. "MTT αντίδραση" του Rogan Grant – Δική του δουλειά (CC BY-SA 4.0) μέσω Commons Wikimedia   
2. "MTT Plate" By Shinryuu – Ίδιο έργο (Δημόσιος Τομέας) μέσω Commons Wikimedia