Γιατί κορεσθίζουμε το θειικό αμμώνιο σε δοκιμή;

Ρωτάτε για τη χρήση κορεσμένο θειικό αμμώνιο σε εργαστηριακές εξετάσεις. Ο λόγος για τη χρήση του συχνά προέρχεται από την ικανότητά του να πρωτεΐνες ίζημα . Εδώ είναι μια κατανομή:

1. Η αρχή:

* Το θειικό αμμώνιο (NH₄) ₂so₄ είναι ένα εξαιρετικά διαλυτό άλας. Όταν προστίθεται σε ένα διάλυμα που περιέχει πρωτεΐνες, αυξάνει την ιοντική ισχύ του διαλύματος.

* Αυτή η αύξηση της ιοντικής αντοχής διαταράσσει τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των μορίων του νερού και της επιφάνειας της πρωτεΐνης, εξασθενίζοντας το κέλυφος ενυδάτωσης που περιβάλλει την πρωτεΐνη.

* Ως αποτέλεσμα, τα μόρια πρωτεΐνης γίνονται λιγότερο διαλυτά και τείνουν να συσσωματώνονται, οδηγώντας σε κατακρημνίσεις .

2. Εφαρμογές σε εργαστηριακές εξετάσεις:

* Καθαρισμός πρωτεΐνης: Το κορεσμένο θειικό αμμώνιο είναι μια κοινή μέθοδος για κλασματικές πρωτεΐνες με βάση τη διαλυτότητα τους. Με την προσεκτική ρύθμιση της συγκέντρωσης θειικού αμμωνίου, συγκεκριμένες πρωτεΐνες μπορούν να κατακρημνιστούν επιλεκτικά, αφήνοντας άλλες πρωτεΐνες σε διάλυμα. Αυτό βοηθά στον καθαρισμό των πρωτεϊνών -στόχων για περαιτέρω ανάλυση.

* Δραστηριότητα ενζύμου: Η κατακρήμνιση θειικού αμμωνίου μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη συγκέντρωση των ενζύμων, την αύξηση της σταθερότητάς τους ή την απομάκρυνση των αναστολέων. Αυτό είναι ιδιαίτερα χρήσιμο στη μελέτη της κινητικής ενζύμου και της λειτουργίας.

* ανοσοκαταβύθιση: Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί αντισώματα για να συλλάβει συγκεκριμένες πρωτεΐνες από ένα σύνθετο μίγμα. Το θειικό αμμώνιο μπορεί να προστεθεί στο μείγμα πριν από την εισαγωγή του αντισώματος, για να μειωθεί ο όγκος και να αυξηθεί η συγκέντρωση της πρωτεΐνης -στόχου, βελτιώνοντας έτσι την αποτελεσματικότητα της διαδικασίας ανοσοκαταβύθισης.

3. Πλεονεκτήματα και εκτιμήσεις:

* Σχετικά φθηνό και εύκολα διαθέσιμο: Το θειικό αμμώνιο είναι ένα οικονομικά αποδοτικό αντιδραστήριο για την κατακρήμνιση των πρωτεϊνών.

* απαλή στις πρωτεΐνες: Σε σύγκριση με άλλες μεθόδους βροχόπτωσης, το θειικό αμμώνιο είναι γενικά λιγότερο σκληρή στις πρωτεΐνες, μειώνοντας τον κίνδυνο μετουσίωσης.

* Υψηλή συγκέντρωση άλατος: Ενώ είναι αποτελεσματική, η υψηλή συγκέντρωση άλατος μπορεί να επηρεάσει τις εφαρμογές κατάντη. Μπορεί να χρειαστεί να αφαιρεθεί ή να προσαρμοστεί για βέλτιστη ενζυμική δραστηριότητα ή ανάλυση πρωτεΐνης.

Συνοπτικά:

Το κορεσμένο θειικό αμμώνιο είναι ένα ισχυρό εργαλείο στις εργαστηριακές εξετάσεις, ιδιαίτερα στον καθαρισμό πρωτεΐνης, στις μελέτες ενζυμικής δραστηριότητας και στην ανοσοκαταβύθιση. Η ικανότητά του να καταβυθίζει πρωτεΐνες με βάση τη διαλυτότητα τους παρέχει μια πολύτιμη μέθοδο για τον διαχωρισμό και τη συγκέντρωση πρωτεϊνών ενδιαφέροντος. Ωστόσο, είναι σημαντικό να γνωρίζετε την υψηλή συγκέντρωση άλατος και τις πιθανές επιπτώσεις κατάντη κατά τη χρήση αυτής της τεχνικής.