Χημικές ουσίες που χρησιμοποιούνται στην αλληλουχία Maxam Gilbert;
1. Βασικές χημικές τροποποιήσεις:
* g (γουανίνη): Το θειικό διμεθυλίου (DMS) μεθυλιώνει τη γουανίνη στη θέση Ν7.
* A (αδενίνη) &G (γουανίνη): Το μυρμηκικό οξύ αποπυραιρίνει τόσο την αδενίνη όσο και τη γουανίνη.
* C (κυτοσίνη): Η υδραζίνη διασπάται ειδικά σε υπολείμματα κυτοσίνης.
* C (κυτοσίνη) &t (θυμίνη): Η υδραζίνη παρουσία αλατιού (π.χ., NaCl) θα διασπάσει επίσης σε υπολείμματα θυμίνης.
2. Αντιδράσεις διάσπασης:
* πιπεριδίνη: Αυτό είναι το βασικό αντιδραστήριο για τη διάσπαση του κλώνου. Χρησιμοποιείται μετά τη χημική τροποποίηση για να σπάσει η ραχοκοκαλιά DNA στη τροποποιημένη βάση.
3. Άλλα αντιδραστήρια:
* buffer: Οι λύσεις παρασκευάζονται χρησιμοποιώντας κατάλληλα buffer για τη διατήρηση του ρΗ και των ιοντικών συνθηκών.
* αιθανόλη: Χρησιμοποιείται για την κατακρήμνιση των θραυσμάτων DNA.
* ηλεκτροφόρηση πηκτής ακρυλαμιδίου: Τα τροποποιημένα θραύσματα DNA διαχωρίζονται κατά μέγεθος χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου.
Βασικά σημεία σχετικά με τις χημικές τροποποιήσεις:
* Ειδικές συνθήκες αντίδρασης: Κάθε χημική αντίδραση διεξάγεται υπό συγκεκριμένες συνθήκες ρΗ, θερμοκρασίας και χρόνου για να εξασφαλιστεί η μέγιστη απόδοση και οι ελάχιστες πλευρικές αντιδράσεις.
* Ελεγχόμενη τροποποίηση: Οι αντιδράσεις ελέγχονται προσεκτικά για να τροποποιήσουν μόνο ένα μικρό ποσοστό βάσεων στο δείγμα DNA.
* Ετικέτα: Το ένα άκρο του θραύσματος ϋΝΑ τυπικά επισημαίνεται με ραδιενεργό ισότοπο (π.χ., 32ρ) για απεικόνιση κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης.
Πλεονεκτήματα της αλληλουχίας Maxam-Gilbert:
* Υψηλή ακρίβεια και ανάλυση
* Χρήσιμο για την αλληλουχία μακρά θραύσματα DNA
Μειονεκτήματα:
* Πιο πολύπλοκη και χρονοβόρα από την αλληλουχία Sanger
* Απαιτεί χειρισμό επικίνδυνων χημικών ουσιών
* Λιγότερο συχνά χρησιμοποιείται λόγω της ανάπτυξης πιο αποτελεσματικών μεθόδων όπως η αλληλουχία Sanger.
Επιτρέψτε μου να ξέρω αν θέλετε μια πιο λεπτομερή περιγραφή των ειδικών μηχανισμών αντίδρασης για κάθε χημική τροποποίηση!
